分泌性中耳炎患者鼻咽部表面活性物質的檢測

分泌性中耳炎患者鼻咽部表面活性物質的檢測

中華耳鼻咽喉科雜志 1999年第5期第34卷 臨床研究

作者：邱麗華　秦學玲　李芳碧

單位：610041 成都 四川省腫瘤醫院耳鼻咽喉科（邱麗華）；華西醫科大學附屬第一醫院耳鼻咽喉科（秦學玲）；四川省第五人民醫院五官科（李芳碧）

關鍵詞：中耳炎；伴滲出性；；磷脂類；；鼻咽；；粘膜

　　摘要　目的　通過定量測定健康人及分泌性中耳炎（secretory otitis media,SOM）患者鼻咽部灌洗液中代表表面活性物質的卵磷脂含量，進一步證實鼻咽部表面活性物質的存在，以探討SOM的發病機理。方法　采集健康人和SOM患者鼻咽部灌洗液，用分光光度計法測定卵磷脂含量並進行對照。結果　SOM患者鼻咽部灌洗液中卵磷脂含量為（8.637±2.730）mg/L(±s，下同)，明顯低於健康對照組的（39.212±2.437）mg/L，兒童SOM患者其鼻咽部灌洗液中卵磷脂含量（8.062±2.925）mg/L較健康同齡對照組（39.787±2.557）mg/L顯著減少，表面活性物質含量與SOM病程無明顯相關。結論局部表面活性物質減少可能是SOM發病機理之一，外源性表面活性物質的應用和促進內源性表面活性物質的分泌可能是預防和治療SOM的途徑之一。

Measurement of surfactant in irrigating fluid from the nasopharynx of patients with secretory otitis media

QIU Lihua^*, QIN Xueling, LI Fangbi.

　　^*Department of Otorhinolaryngology, First Hospital of West China Medical Science University,Chengdu 610041

　　Abstract　Objective　dysfunction of the eustachian tube is believed to play a role in the pathogenesis of secretory otitis media (SOM). In the animal model, previous investigators have found that surfactant in the eustachian tube could decrease the eustachian tube opening pressure and improve eustachian tube functions. Because the nasopharynx is anatomically adjacent to the eustachian tube and the membrane of the nasopharynx continues to the middle ear via the eustachian tube, we hypothesized that the surfactant could also present in the nasopharynx and then designed the following experiment to confirm this hypothesis.Methods The concentrations of surfactants in the nasopharyngeal irrigating fluid were measured in normal control and SOM patients.Results (1) The surfactant from the SOM patients were significantly lower than that from the normal control (8.637±2.730)mg/L vs.(39.212±2.437)mg/L. (2) The concentration of surfactant from child SOM was also significantly lower than that of the normal control (8.062±2.925) mg/L vs. (39.787±2.557) mg/L. (3) The concentration of surfactant of SOM was not associated with the course of SOM. Conclusion Surfactant reduction in the nasopharynx could indirectly reflect the level of the surfactant in the eustachian tube and the middle ear and influence the eustachian tube function. So surfactant reduction is one of the causative factors in SOM. The strategy of increasing surfactant in the nasopharynx and eustachian tube should be beneficial to reducing persistent secretory otitis media.

　　 　　Key words　Otitis media with effusion 　　Phospholipids 　　 Nasopharynx　　Mucous membrane

　　分泌性中耳炎(secretory otitis media ,SOM)的發病與咽鼓管功能障礙、免疫反應及感染有關。咽鼓管功能障礙表現在粘膜表面張力受到其自身分泌表面活性物質影響。我們采用分光光度計法定量測定鼻咽部灌洗液中表面活性物質含量，間接反映SOM患者中耳、咽鼓管表面活性物質的改變。

　　 材料及方法

　　一、主要試劑與設備

　　1.試劑：磷標准儲備液(100 μg/ml)、磷標准使用液(10μg/ml)、消化液（高氯酸-硝酸1∶4混合液）、5%钼酸铵溶液、Hank 液（均由我院實驗室配制）；卵磷脂標准品（重慶東方試劑廠）。

　　2.設備：72型分光光度計（上海分析儀器廠）。

　　二、實驗對象

　　1. 健康對照組：共40例。本校實習同學身體健康無耳鼻咽喉疾患（成年組），年齡19～24歲，平均22歲；男14名，女11名。健康兒童（未成年組），年齡8～12歲，平均10歲；男11名，女4名。

　　2. SOM組：共40例，本科門診及住院患者（病程1周～18月）。成年組25例，其中男16例，女9例；年齡18～59歲，平均39歲。未成年組15例，其中男9例，女6例；年齡5～13歲，平均年齡9歲。

　　3. 診斷標准：①耳悶、耳鳴和聽力下降；②鼓膜內陷、活動受限和積液征；③純音測聽：傳導性聾；④聲導抗：鼓室壓圖為“B”型、镫骨肌反射消失；⑤鼓膜穿刺抽出積液。

　　4.排除標准：鼻咽癌所致的SOM，腺樣體肥大造成咽鼓管咽口機械阻塞者，伴鼻炎、鼻窦炎者。

　　三、實驗方法

　　1.鼻咽部灌洗液的采集：30 ml 細胞沖洗液在纖維支氣管鏡下灌洗鼻咽部，回吸液約20～25 ml。

　　2.鼻咽部灌洗液表面活性物質的測定：采用分光光度計法^［1］。

　　灌洗液經高氯酸-硝酸消化，消化液中的磷在酸性條件下與钼酸铵結合生成磷钼酸铵，此化合物經對苯二酚、亞硫酸鈉還原成藍色化合物——钼藍。用分光光度計在波長660 nm處測定钼藍的吸光度在磷標准曲線上求出磷含量，以磷含量乘以25計算出代表表面活性物質的卵磷脂含量。

　　標准曲線的制備：取25 ml比色管7支，分別加入磷標准使用液各0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，各管再分別加入5%钼酸铵液2 ml，20%亞硫酸鈉1 ml、0.5%對苯二酚1ml，加蒸餾水至20 ml，放置30 min後測吸光度值並繪制磷標准曲線圖。吸光度值與磷含量之間呈良好的線性關系，相關系數r=0.9984，回歸方程為：Y=6.66×10^-2X+1.42×10^-3，通過每次實驗所做的標准曲線，共30次，求得標准曲線的相對標准偏差為2.74%～5.20%。

　　樣本的測定：經消化的樣本和空白對照按標准曲線繪制方法進行顯色測定，將測得的吸光度值在磷標准曲線上查出磷含量，並計算出代表表面活性物質的卵磷脂含量。通過連續測定混合樣本6次，得到樣本相對標准偏差為5.57%。

　　方法准確度（樣本加標回收實驗）：取樣本6份，每份取20 ml回收液，置於2支比色管中，每管10 ml，其中一管加入卵磷脂標准品30 μg，一管不加， 按測定樣本的方法進行測定，將測定結果在磷標准曲線上查出磷含量，然後求出卵磷脂的回收率。回收率為86%～90%。

　　 結果

　　1.SOM 患者鼻咽部灌洗液表面活性物質含量的測定：鼻咽部灌洗液中代表表面活性物質的卵磷脂含量健康對照組為(39.212±2.437)mg/L (±s，下同)，SOM 患者為(8.637±2.730)mg/L，兩組比較經t檢驗(t =3.252)差異有顯著性(P＜0.005)。

　　2.按年齡分組，SOM患者鼻咽灌洗液中表面活性物質的卵磷脂含量與健康對照組的比較見表1。

表1　不同年齡組SOM患者鼻咽部灌洗液卵磷脂含量（±s）與健康對照組比較

分組 例數 卵磷脂含量(mg/L) t值 P 值 SOM組 健康對照組 未成年 15 8.062±2.925 39.787±2.557 3.197 0.005 成年　 25 9.478±2.313 38.656±2.278 3.174 0.005

　　3. 不同病程SOM患者鼻咽灌洗液中卵磷脂含量測定見表2。

表2　不同病程SOM患者鼻咽部灌洗液卵磷脂含量（±s）

病 程 例數 卵磷脂含量(mg/L) 3個月以內 14 8.276±2.437 3～12個月 17 9.062±2.336 1年⁺ 　 9 8.677±3.487

　　不同病程SOM患者鼻咽灌洗液中卵磷脂量經方差分析P=0.1，差異無顯著性。

討論

　　關於分泌性中耳炎發病因素研究，目前認為主要由咽鼓管功能障礙、感染因素和免疫變態反應因素所致，其中作為主要病因的咽鼓管功能障礙又分為機械性阻塞和功能性阻塞。1963年 Flisberg等^［2］首先提出在咽鼓管中可能存在與肺表面活性物質相似的物質，認為表面活性物質參與了咽鼓管的開放機制。Tsuruhara等^［3］（1989）和 Fornadley等^［4］（1994）經動物實驗證實表面活性物質與咽鼓管的開放有關。歷年來有關表面活性物質與SOM 關系的基礎研究表明，中耳腔、咽鼓管及鼻咽部的確存在著表面活性物質及其分泌細胞，並證實了它對咽鼓管開放的影響。本實驗結果表明，SOM 患者鼻咽部灌洗液中代表表面活性物質的卵磷脂量比健康對照組明顯減少，與其他學者實驗相吻合。

　　為了科學、准確地測定鼻咽部表面活性物質，本實驗采用仰臥垂頭位、使鼻咽部處於最低位，在纖維支氣管鏡直視下沖洗鼻咽部，每次灌入2～4 ml，共30 ml，並立即回吸沖洗液，使每份樣品中所含物質僅來自鼻咽部，且容積相同，從而保證樣品不受污染和取量客觀、准確。在測定表面活性物質的實驗方法上采用精確度較高的分光光度法，測定灌洗液中磷含量來換算卵磷脂量，而表面活性物質的主要成分為卵磷脂，因此可定量反映出灌洗液中表面活性物質含量。在實驗測定中所做標准曲線相對標准偏差低，樣本加標回收實驗其磷回收率高，說明實驗所得數據准確、可靠，為定量測定鼻咽部表面活性物質建立了一個可靠、簡單的方法。

　　SOM 患者以兒童居多，長期中耳積液可導致聽力損害，語言發育遲緩，慢性中耳炎急性發作。有學者認為主要與兒童鼻咽、中耳及咽鼓管局部解剖和免疫功能不健全有關^［5］。本實驗把12歲以下SOM患者與健康對照組相應年齡組進行了鼻咽灌洗液中卵磷脂含量對比分析，發現SOM患兒的卵磷脂明顯低於同齡健康兒童。結果還表明，健康對照組及SOM組中未成年與成年組比較，鼻咽部灌洗液中卵磷脂含量差異無顯著性，說明局部表面活性物質的含量可能與年齡無關。

　　SOM患者不同病程組中，卵磷脂含量差異無顯著性，說明鼻咽部表面活性物質的變化不能反映病程的長短，這可能與SOM是一慢性炎症性疾病有關。疾病進入慢性穩定階段,其病理改變和局部反應趨於緩慢、漸進,因此影響咽鼓管開放功能的表面活性物質也呈現了較穩定結果。表面活性物質減少是SOM的病因還是結果尚有爭議，更多學者認為表面活性物質減少影響了咽鼓管的開放壓是SOM發病機制之一^［6，7］。因此，我們考慮外源性表面活性物質的應用和促進內源性表面活性物質的分泌可能是預防和治療SOM的途徑之一。

　　本課題系四川省科委科研基金資助項目(編號：G0096)

　　 參考文獻

　　1　崔福生.醫學生化檢驗手冊.天津：天津科學技術出版社，1982.235-238.

　　2　Flisberg K, Zngelstedt S, Ortegren U, The valve and “locking” mechanisms of the eustachian tube. Acta Otolaryngol Suppl, 1963,182:57-68.

　　3　Tsuruhara K, Morii S, Kumazawa T, Ultracytochemical demonstration of phospholipids in the surface layer of the guinea pig eustachian tube. Acta Otolaryngol, 1989,108:434-441.

　　4　Fornadley JA, Burns JK. The effect of surfactant on eustachian tube function in a gerbil model of Otitis media with effusion. Otolaryngol Head Neck Surg, 1994, 110: 110-114.

　　5　White P. Effect of exogenous surfactant on eustachian tube function in the rat. Am J Otolaryngol, 1989,10:301-304.

　　6　Grace A, Kwok P, Hawke M. Surfactant in middle ear effusions. Otolaryngol Head Neck Surg, 1987,96:336-340.

　　7　楊偉炎，王榮光，孫建和,等.咽鼓管粘膜分泌細胞與表面活性物質樣板層體的觀察.中華耳鼻咽喉科雜志, 1995,30:224-226.

（收稿：1999-01-11　　修回：1999-07-12）