A組鏈球菌咽炎的快速診斷方法
中華兒科雜志 1998年第2期第36卷 論著摘要
作者：董太明 黃震東 陳劍光 吳紅穗 羅健 符永恆 陳志紅
單位：510080 廣東省人民醫院 廣東省心血管病研究所風濕熱實驗室
風濕熱(RF)的發生僅僅與A組鏈球菌(GAS)的上呼吸道感染有關，因而GAS咽炎的早期診斷很重要。我們嘗試應用葡萄球菌蛋白A(SPA)-協同凝集試驗快速檢測GAS，並作蘭菲分組，以對照研究該法的敏感性和特異性。
材料：用滌綸咽拭子對門診222例急性咽炎患兒取咽分泌物各2份，一份作快速檢測，另一份接種到5%羊血平板，35℃培養18～24小時，發現有β-溶血菌落的血平板，分離作純培養後按WHO工作手冊作蘭菲分組確證。
32132A組鏈球菌標准菌株由美國明尼蘇達大學世界衛生組織(WHO)鏈球菌研究和參考合作中心惠贈。
方法：(1)按WHO工作手冊規定方法制備兔抗GAS血清，抗體效價1∶16，按說明與SPA菌體試劑(衛生部上海生物制品研究所)混合制成快速診斷試劑。(2)取含急性咽炎咽分泌物的滌綸咽拭子，浸於含0.3 ml無菌生理鹽水的小試管中，浸泡3分鐘，盡量擠出所含的液體，室溫 1 500 r/min離心10分鐘，棄去上清液，沉澱物加2 mol/L的亞硝酸鈉20 μl，33%冰乙酸10 μl，混勻後置室溫反應5分鐘，加0.05%酚紅5 μl，用5 mol/L的NaOH調節顏色至橙色。室溫下1 500 r/min離心10分鐘。(3)取15 μl上述抽提液，置於黑色反應板上，加15 μl的快速檢測試劑，充分混勻後，在2分鐘內觀察結果，出現粗大顆粒、液體透明者判為陽性；無顆粒出現、液體呈白色混懸液者判為陰性。每次試驗均采用陽性對照、陰性對照、SPA標記未免疫兔血清對照、SPA菌體懸液自身對照。
結果：222例標本對照研究中，192份為完全符合，總體符合率為86.5%，其中敏感性77.0%，特異性92.6%，陽性期待值87.0%，陰性期待值86.2%。我們發現，SPA-協同凝集試驗檢出陽性率與咽拭子培養的菌落數有關，菌落數越多者，陽性率越高；反之則越低。根據血平板培養β-溶血菌落計數分為4個等級：(1)＜10個菌落，(2)為11～50個菌落，(3)為51～100個菌落，(4)為多於100個以上、滿布平板。本組(4)者總共26例，SPA檢出25例，敏感性達96.1%，而(1)者敏感性僅50.0%。假陰性20例，其中9例出現在(1)，6例出現在(2)，二者合計占假陰性75.0%，如果(1)被認為是病菌攜帶者，敏感性達到84.0%。
討論：GAS急性咽炎的早期診斷一直是困擾臨床醫師的一個難題，GAS急性咽炎的早期診斷如果單純依靠臨床表現，則很難與其他微生物感染的咽炎(如常見的病毒性咽炎)相鑒別，因而臨床需要有快速檢測GAS的方法，幫助臨床醫師對急性咽炎患兒在初次就診時作出快速的診斷，使患兒獲得恰當的治療，從而達到有效預防RF的目的，並能減少兒童之間GAS傳播的機會；對於非GAS咽炎中的病毒性感染則可避免使用抗生素，減少抗生素耐藥和副作用發生的機會。
SPA-協同凝集試驗是較為常用的幾種快速檢測GAS方法之一，其特點是快速，僅需20～30分鐘；簡便易操作，不需要復雜設備，在普通臨床實驗室即可開展此項工作；結果容易判讀，並且成本低。國外對此研究較多，其敏感性大多在70%～90%之間，特異性一般都較好，多在90%～100%之間。而本組的檢測結果與之相比，敏感性略低，特異性尚可。快速檢測GAS的各種方法對菌落數少的患者敏感性均較低，SPA-協同凝集方法也存在類似的問題，當菌落數小於10個時，本組的敏感性僅有50.0%。
總之，SPA-協同凝集試驗用於A組鏈球菌咽炎的診斷，具有快速、價廉、簡便易操作的特點，特異性較高，但敏感性尚不令人滿意。
(收稿：1996-11-04 修回：1997-05-20)